نموذج مباراة توظيف متصرف — المكتب الوطني للسلامة الصحية للمنتجات الغذائية (أونسا) — الكيمياء / علم السموم — 8 دجنبر 2019
باختصار
هذا نموذج امتحان كتابي سابق لمباراة متصرف لدى المكتب الوطني للسلامة الصحية للمنتجات الغذائية (أونسا) (دورة 8 دجنبر 2019)، منشور على وظيفة إنفو للاطلاع والتحميل المجاني بصيغة PDF مع تصحيح مقترح.
- الجهة المنظمة
- المكتب الوطني للسلامة الصحية للمنتجات الغذائية (أونسا)
- الدرجة
- متصرف
- التخصص
- الكيمياء / علم السموم
- الدورة
- دورة 8 دجنبر 2019
- عدد الصفحات
- 10
- لغة الأسئلة
- الفرنسية
- التصحيح
- تصحيح مقترح متوفر في هذه الصفحة
اختبار كتابي مدته 3 ساعات ومعامله 2، من 4 تمارين في 10 صفحات (مطيافية الكتلة، الكروماتوغرافيا، ضمان الجودة في المختبر، معايرة الإيفرمكتين بـHPLC). الصفحات 1 إلى 4 و6 إلى 10 مرقمة؛ الصورة 293 صفحة جداول بدون رقم مقروء وُضعت في الموضع الخامس. نسخة عليها علامات مترشح. تنبيه: النسخة تحمل علامات مترشح على بعض الأجوبة.
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📝 نص أسئلة النموذج (مستخرج آلياً من الصفحات الممسوحة)
استُخرج هذا النص آلياً من صور الامتحان وقد يحتوي على أخطاء في القراءة — الصور أعلاه هي المرجع.
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FFICE NATIONAL DE SECURITE SANITAIRE DES PRODUITS ALIMENTAIRES b.
CONCOURS DE RECRUTEMENT DES ADMINISTRAREURS EN OPTION : :
CHIMIE /TOXICO
EPREUVE ECRITE-SESSION DU 08 Décembre 2019
DUREE : Trois (03) Heures - Coefficient : Deux (02) . .
Consignes à lire impérativement :
Cette épreuve se décompose en 4 Exercices en 10 pages. -
-Les différentes parties étant indépendantes les unes des autres) Vous pouvez répondre dans l'ordre quivous
convient.
Seule la calculatrice NON PROGRAMMABLE est autorisée, aucun autre matériel électronique (téléphone -
portable, tablette...) 065 6
١|566 tenu compte dela présentation, de la concision des réponses et du respect des consignes. -
Les feuilles de brouillon ne seront pas notées -
لعا نات ددج الل و الك ب م كن ك_. تك
Exercice | :
Choisir la ou les bonnes réponses,
La spectrométrie de masse est une méthode d'analyse qui sépare les ions en fonction de leurs : .1 لا
Rapport Q1lsur 3 .2
b: Rapport masse sur charge
masse .©
d:Rapportilon Energy sur Collision Energy 2
Pour un spectromètre de masse triple quadripôle le but de Q0 est de et __les ions .2 لا
dans l'analyseur de 1.
a focaliseretle transférer
b. amplifier et.jeter
c'multiplierettransférer
d'concentreret amplifier
Quel gazest utilisé comme gaz "rideau" dans l'interface de vide? .3ق
Helium Ultra Pur .2
b:Octane Ultra Pur
Oxyde de carbone Ultra/Pur .©
d:'Azote Ultra Pur
Quel gaz est utilisé comme gaz "nébuliseur" pour la sonde ELECTROSPRAY:? .4-4
أن :انا Helium ,2
Oxyde de carbone Ultra Pur .ط
c. Airzéro
d’GazExhaust
Chaque MS (quadripôle, TOF) fonctionne mieux sous vide. Pourquoi? .5
a: Parce que les niveaux de sensibilité se stabilisent quand le niveau de vide diminue,
Parce que la résolution est indirectement proportionnelle au niveau de vide: .5
c. Parce que les collisions avec d'autres ions et molécules indésirables sont minimisés sous vide.
Parce quelles ions se déplacent rapidement à travers 12 chambre à vide à/des niveaux de vide faible. .0
Quelle est la fonction du gaz rideau ? .6
a. empêcher les analÿtes de saturerle détecteur
b. favoriser la vaporisation des solvants indésirables dans les gouttelettes chargées etempêcher les
matières indésirables d'entrer dans le spectromètre de masse.
maintientila source sèche pouraugmenterllefficacité d'ionisation. .>
Rôle de l'étalon externe dans la méthode 6-5 .7 1
a. Il permet de vérifier le bon fonctionnement du GC-MS/MS
b.Il permet de vérifier le bon fonctionnement de l'étape de dérivation
du tout مع ف c.lne’sert finalement
d. Il participe à labonne ambiance car on oublie souvent de l'ajouter
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N8. Pour LEMSMS les PPGs sont
utilisés pour :
3. Optimiser et calibrer Q1 et Q3/en mode négatif
b. Optimiser et calibrer Q1et 03 en mode positif
ا Dissoudrefs réserpine
d; Optimiser le ris
.قا Lors d'une Calibration PPGs, la résolution doit être comprise entre :
3: 0.403 3
b. 0557 Da
© 06030.83
d. O8Daeti0a
#10. Lors d'une Calibration PPGs, le décalage en masse doit être compris entre :
8 -1Daet+1Da
b. 05 0340.5 و
؟ 0,203+ 3
d. 0103+ و
#11: La résolution d'un pic (ion) est :
3. Lalargeuràla base de ce pic
b. Lahauteur de ce pic
© Lalergeurà mi-hauteur de ce pic
d. Ladistance entre le sommet de ce pic et le sommet du pic quille suit
€: La distance entre le sommet de ce pic et le sommet du pic qui le précède
V2: Le principe de la séparation en chromatographie en phase gazeuse repose:
8, Sur le principe de l'exclusion stérique
b; sur le principe de échange d'ions
ع majoritairement sûr la Volatilité des analytes
d. en partie sur les interactions hÿydrophobes’entrel'analyte دا أن phasestationnaire
* 13: Quelle tension est généralement appliquée à Q0 en mode scan positif.?
3. -10V
» اط 7
ع 080546008061013 (DP)
0: 000158611366 de 17
*. 14. L'augmentation de ١3 résolution sûr un quadripôle
a. N'est pas possible
b'Estpossible sans conséquence surle signal
c1Est possible mais au prix d'une perte de signal
d. Permet de programmer l'enregistrement de la masse exacte des analytes à |a 3ème
décimale
K 15.Les réactions de dérivatisation :
2. permettent de rendre les pics chromatographiques plus fins
b'allourdissenties analytes et changentiles spectres de masse
© sépare les ions'en fonction de leurs rapports masse sur charge
d'ne servent à rien
= 16: Sur 00 16م quadripôle :
a, La cellule de collision est une boite en plastique type Tupperware®
b; Le premier quadripôle permet de sélectionner en haute résolution lesions précurseurs
c. Le mode d'acquisition product lon scan peut est utilisé notamment lors de la mise au point
de la méthode d'acquisition
d: Le mode d'acquisition du signal selon le principe du SRM est de loin celui amenantau
mellleur rapport signal sur bruit
117: En mode MSMS:
a. QOfiltre, Q1focalise, Q2 fragmente et Q3 scanne
5. Q0 focalise, Q1 scanne, Q2 fragmente et Q3/scanne
c. 09 focalise, Q1 filtre, Q2 138012016 6 Q3'scanne
di Q0focalise, Q1'filtre, Q2fragmente et Q3/filtre
e. QOfiltre, 0153006 Q2fragmente et Q3 filtre
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En mode MRM: قد
a. Go filtre, Qi focalise, 2 fragmente et Q3scanne
fragmente et Q3 scanne دو b. Q0 focalise, 01 scanne,
focalise, 1 filtre, Q2 fragmente et Q3scanne مو c
d. GQOfocalise, 1 filtre, Q2 fragmente ero3filtre
e. Qofiltre, 01 scanne, Q2 fragmente el 3 filtre
uelles sont 6 1 , :
Parmi les propositions suivantes concernant jonisation en mode Electrospray; lesq .239
a, Champ électrique haute tension
b, Tubeen céramique chauffé jusqu’à 2506
c Désolvatation
d. Aïguille de corona
e. Formation des lonsen phase gazeuse
rforman 1
عم Parmi les propositions suivantes concernant La chromatographie en phase liquide ultra .420
indiquez celles qui sont exacte :
Débit:0,2à 2ml/min, pression 6000 .3
b. Débit: 0,2 31,5mt/min, pression 15000
latailedes particules de ja colonne 3 HM &
à, Lataille des particules de ja colonne 1,8 HmM ; . Pastel
la norme 150/CEI 17025 version 2017 exige que le Jaboratoire identifie les risques liés af -21 £
a. L'impartialité.
b. La sécurité.
confidentialité. _ ها c
ÿ22- Le laboratoire prévoit en été de prendre du personnel intérimaire ou des stagiaires Pour comper
départs du personnel pour les vacances:
a. lspourront réaliser des essais SOUS accréditations. 0
b. LanormeNFEN {5017025 ne prévoit pas de faire réaliser des essais 5 accréditations
personnel extérieur à l'organisme:
j23- Le Jaboratoire envisage lors de sa prochaine évaluation de mettre dans sa portée la nouvelle ve
norme sur Un essai accrédité qu'il pratique déjà, pour cela, que devra-t-il faire préalablement ?
Validerla méthode d'essai, former le personnel, rédiger une instruction etestimerlesin .3
de mesure.
b. Vérifier l'adéquation de son matériel avec les nouvelles exigences normatives, rédiger u
Instruction et estimer les incertitudes de mesure
c. nalyseret formaliser les nouvelles exigences normatives, Vérifier l'adéquation de sonm
modifier l'instruction existante sinécessaire:
24-Le laboratoire fait réaliser la vérification externe de ces équipements par un prestataire extern .«
accrédité.
obligatoirement une étiquette sur chaque équipementavec la date del'étalonn عالى ١١ .2
date du prochain étalonnage.
la fiche de vie de chaque équipement (papier ou logiciellde métrologie). امم ا b.
du fournisseur est suffisante sans autre formalisme ع6 ع je
K25-L'organisation et le fonctionnement du laboratoire doivent permettre d'assurer ?
respect systématique des délais عا a,
conformité aux exigences applicables. ها b.
son ss Le LE des demandes implicites des clients.
le l'apposition du logo d'
sur son rapport, le laboratoire peut-il ? اح ابت Modifier ta
Z pourse rapprocher dela coule ù
ا urdu lo &
Unllogo plusimportantque celui de son entreprise go de l'entreprise 1161526 .5
Mettre Unlogo plus petit que celui de son entrepri .€
W27-Dans quel document, la politique qualité du laboratoire ee
ج 1 ree jecti
“Un manuel qualité. tses objectifs doivent-ils être défi .2
b. Une déclaration dela politique qualité,
c. Une procédure qualité.
diffusi ١ 28-18 2
a 0 d'un document peut se faire ?
Fu prévenirie destinataire. 5
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w'29-Au cours d'un audit interne, on met en évidence un Fi
résultat d'une analyse, quelle est ja démarche à suivre > problème
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QUE du problème | coblème etje ٍ) ز 3 a. J'ouvre une fiche de non-conformité
مع b, J'ouvre une fiche de non-conformité,} analyse Je DE Problème, je corrigé
ع non-conformité, j'analyse l'étenc ع6 ع0 وو اع
préviens mes clients impactés 7
L'amélioration continue peut se faire par l'utilisation de quels moyens Arection -30 +
ee ب L'analyse des indicateurs du laboratoire au cours de la revue de .3
b. Les questionnaires de satisfaction envoyés annuellement chez les clien
[Les auditsinternes et externes €
Exercice Il:
اميت ER
ntes X et Y par 0 :
La validation d'une méthode multi analyte de dépistage et de confirmation des composa , Me
onn =
83 عي LEMSMS qui possèdent resi ectivement une limite de erformance requise
résultats suivants
Molécule X :
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Signal Signal2
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1). indiquerl'objectifide Ja validation et 06001١ les différents critères etla méthodologie pour valider une méthode.
2( Sachant quelatconcentration du supplémenté Utilisé pour Valider la méthode est 1 u1g/kg pour X et Y
Caleuler la concentration estimée, les paramètres de validation, interpréter les résultats trouvés et ti:
des conclusions sachant que selonla décision 2002/657 on a :
Fraction|pondérale ع Justesseÿ
2: =50%8+20%
pe — 30% à + 10%
1 1 210 20% 3+10%
- Les coeffici ا 1 5 =:
See ents de Meatons dursignal qui عه doivent pas dépasser le nive £
orwitz (Décision n"2002/657/CE) CV = 21-95 6 dans laquelle © au) calculé avec l'équa
6 e 8 5
exprimée كى ةركام وت (exposant) ع 10/(par exemple1 mg/g - 3 représente. la) fraction de la m:
ci-dessous : } Des exemples figurent لاة tab)
Fraction pondérale
2 1310 =
2103100 .
160 1000 23
“lin'ya pas de val م 21000
valeur limite de CVepour des niveaux de co 16
possible. ncentrations en analyte >
0 Hg/kg: Les CV doivent donc او
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les coutticients de variations du temps de réters 7 is 27 sé
4) Sipourte molécule x on obtient des hmites CCa et CCE indra € ta ا
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Lvr et CC er فى + 1 ts
Que peut-on conclure concernant validation d méth ef ’ "
5) L'analyse d'une série d'échantillons aprés validation لي nét e
la molécule X & une concentration de 600 que 20 م0 : : ١
6176 utilisée pour analyser ces échantillons et laquelle peut-on ) f f
Exercice All
ما اناو contrôle de routine de la recherche de traces < omf M 1 :
aumiimun un échantillon dépourvu de traces de M supolément ug/k ١ :
onalyte/atre étalon titerne) obtenue de M sur arte de contrôle
Molecule M à 0, 1ug/kg
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Ce modèle est l'épreuve écrite du concours de recrutement des administrateurs de l'ONSSA, option Chimie / Toxicologie, session du 08 décembre 2019. Durée : 3 heures, coefficient 2, calculatrice non programmable autorisée. L'épreuve compte 4 exercices sur 10 pages : un QCM de 30 questions (spectrométrie de masse, chromatographie, ISO/CEI 17025), la validation d'une méthode LC-MS/MS selon la décision 2002/657/CE, une carte de contrôle, et un dosage HPLC de l'ivermectine. Voici une correction proposée.
Conseil : les exercices sont indépendants. Commencez par le QCM (rapide) puis par l'exercice IV (calcul court), et gardez le plus de temps pour l'exercice II, le plus long et le plus lourd en barème.
Exercice I — QCM (une ou plusieurs bonnes réponses)
Le vocabulaire (Q0, gaz rideau, PPG, Declustering Potential) est celui des triples quadripôles de type Sciex (API / QTRAP).
- b — La spectrométrie de masse sépare les ions selon leur rapport masse/charge (m/z), jamais selon la masse seule.
- a — Q0 est un guide d'ions (non résolutif) : il focalise le faisceau et le transfère vers Q1.
- d — Le gaz rideau est de l'azote ultra pur : inerte et disponible en grande quantité (générateur d'azote).
- c (réponse probable) — Sur ces sources, le gaz de nébulisation (GS1) est de l'air zéro, ou de l'azote. L'hélium, le monoxyde de carbone et le « gaz exhaust » ne conviennent pas.
- c — Sous vide, le libre parcours moyen des ions augmente : ils n'entrent pas en collision avec d'autres molécules avant d'atteindre le détecteur, d'où une meilleure transmission et une meilleure sensibilité.
- b — Le gaz rideau, à contre-courant devant l'orifice, aide à désolvater et empêche les gouttelettes, les molécules neutres et les impuretés d'entrer dans l'analyseur.
- a (réponse probable) — Ajouté au moment de l'injection, l'étalon externe contrôle le bon fonctionnement de l'appareil GC-MS/MS (injection, séparation, détection). Le rendement de dérivation se contrôle plutôt avec un étalon interne ou un témoin dérivé. Les options c et d sont fantaisistes.
- a et b (réponse probable) — Les solutions de polypropylène glycols (PPG) servent à régler la résolution et à étalonner l'échelle de masse de Q1 et de Q3, en mode positif comme en mode négatif. La réserpine sert à contrôler la sensibilité, pas à régler les quadripôles.
- c — Pour une résolution « unitaire », la largeur à mi-hauteur visée est d'environ 0,7 Da, donc entre 0,6 et 0,8 Da.
- d (réponse probable) — La tolérance d'exactitude de masse visée lors d'une calibration sur un quadripôle est de ±0,1 Da.
- c — La résolution s'exprime à partir de la largeur du pic à mi-hauteur (FWHM).
- c — En CPG, la séparation dépend surtout de la volatilité (température d'ébullition) des analytes, modulée par leur affinité pour la phase stationnaire. Exclusion stérique et échange d'ions relèvent de la chromatographie liquide.
- a (réponse probable) — En mode positif, Q0 est habituellement réglé vers −10 V (le potentiel d'entrée vaut alors environ +10 V). Le DP est une tension de l'orifice, pas de Q0.
- c — Un quadripôle peut travailler à une résolution plus fine, mais il transmet alors moins d'ions : le signal diminue. Un quadripôle ne donne pas de masse exacte à la 3e décimale (option d).
- b, et a dans une moindre mesure (réponse probable) — La dérivation greffe un groupement (silyle, acyle…) : l'analyte devient plus lourd et son spectre change. En CPG, elle rend aussi l'analyte plus volatil et moins polaire, donc les pics sont moins traînants et plus fins.
- c et d (réponse probable) — Le mode product ion scan sert à choisir les fragments lors de la mise au point de la méthode, et le SRM/MRM donne le meilleur rapport signal/bruit. L'option b est à écarter : Q1 sélectionne à résolution « unitaire », pas en haute résolution. L'option a est fantaisiste.
- c — En MS/MS en mode « ions fils » : Q0 focalise, Q1 filtre le précurseur, Q2 (cellule de collision) le fragmente et Q3 balaie les fragments.
- d — En MRM, Q1 et Q3 sont tous deux fixés (filtres) sur une transition précurseur → fragment.
- a, c, e — L'electrospray repose sur un champ électrique de haute tension, sur la désolvatation des gouttelettes chargées et sur la formation d'ions en phase gazeuse. L'aiguille corona et le tube céramique chauffé (vaporiseur) appartiennent à l'APCI.
- b et d — L'UHPLC travaille avec des colonnes à particules inférieures à 2 µm (1,7–1,8 µm), à des pressions allant jusqu'à environ 15 000 psi (≈ 1 000 bar), et à des débits modérés. Des particules de 3 µm relèvent de l'HPLC classique.
- a — L'ISO/CEI 17025:2017 demande au laboratoire d'identifier en continu les risques pesant sur son impartialité. La confidentialité fait l'objet d'engagements, pas de cette analyse de risques.
- a — Du personnel temporaire ou des stagiaires peuvent réaliser des essais accrédités s'ils sont qualifiés, formés, supervisés et habilités par le laboratoire. La norme ne l'interdit pas.
- c — Pour une méthode normalisée déjà pratiquée, on analyse les écarts entre les deux versions, on vérifie l'adéquation du matériel et on met à jour l'instruction si nécessaire (vérification, pas revalidation complète).
- b — Les certificats d'étalonnage externes sont exploités et enregistrés dans la fiche de vie de l'équipement. Une étiquette est utile mais n'est pas la seule forme d'identification possible, et l'étiquette du prestataire ne suffit pas sans exploitation des résultats.
- b — L'organisation doit garantir la conformité aux exigences applicables (norme, clients, autorités, organisme d'accréditation).
- c (réponse probable) — Les règles d'usage du logo d'accréditation interdisent d'en modifier les couleurs ou les proportions et de le rendre plus grand que le logo de l'entité.
- a (réponse probable) — Réponse classique (ISO/CEI 17025 version 2005) : la politique qualité et ses objectifs figurent dans le manuel qualité. La version 2017 n'impose plus de manuel, mais demande que la politique et les objectifs soient documentés.
- b — Un document maîtrisé est diffusé selon une liste de diffusion, qui permet de retirer les versions périmées.
- c — Dans cet ordre : fiche de non-conformité, évaluation de l'étendue et de l'impact, correction, action corrective, et information des clients dont les résultats sont touchés (rappel ou correction des rapports).
- a, b, c — Revue de direction (indicateurs), satisfaction des clients et audits internes et externes alimentent tous l'amélioration continue.
Exercice II — Validation d'une méthode LC-MS/MS (molécules X et Y, LPMR = 1 ppb)
1) Objectif et critères de validation
Objectif : démontrer, avec des données enregistrées, que la méthode est apte à l'usage prévu (ici dépistage et confirmation de X et Y au niveau de la LPMR) et en connaître les performances et les limites.
Critères (décision 2002/657/CE) :
- Spécificité / sélectivité : analyse d'échantillons blancs (au moins 20). Aucun signal interférent au temps de rétention des analytes.
- Identification : temps de rétention relatif (rapport TR analyte / TR étalon interne) et rapport d'ions entre deux transitions, comparés aux étalons, dans les tolérances de la décision.
- Linéarité / courbe d'étalonnage : au moins 5 niveaux, zéro compris, avec équation et R².
- Justesse (récupération), fidélité (répétabilité, reproductibilité intra-laboratoire), exprimée en CV.
- Limites de décision CCα (risque α de faux non-conforme) et capacité de détection CCβ (risque β de faux conforme, 5 %).
- Robustesse et stabilité de l'analyte en solution et dans la matrice.
Méthodologie : plan d'expérience défini à l'avance, avec des blancs, des échantillons supplémentés au niveau d'intérêt (ici 20 essais à 1 µg/kg) et des gammes d'étalonnage, sur plusieurs jours et opérateurs. Calcul des critères, comparaison aux exigences, puis rapport de validation et déclaration d'aptitude.
2) Concentrations estimées et paramètres de validation
On lit les valeurs moyennes des tableaux « Échantillons supplémentés » et « Courbes d'étalonnage » (amplitude relative = amplitude analyte / amplitude de l'étalon interne), puis on calcule C = (y − b) / a.
| X signal 1 | X signal 2 | Y signal 1 | Y signal 2 | |
|---|---|---|---|---|
| Droite d'étalonnage | y = 12,8298x − 1,0490 (R² = 0,9904) | y = 3,4999x − 0,0734 (R² = 0,9961) | y = 5,0430x − 0,1496 (R² = 0,9952) | y = 1,2512x + 0,0339 (R² = 0,9954) |
| Amplitude relative moyenne (écart-type) | 12,64 (2,56) | 3,93 (0,96) | 3,64 (0,84) | 0,90 (0,22) |
| Concentration estimée | (12,64 + 1,049)/12,8298 = 1,07 ppb | (3,93 + 0,073)/3,4999 = 1,14 ppb | (3,64 + 0,150)/5,043 = 0,75 ppb | (0,90 − 0,034)/1,2512 = 0,69 ppb |
| Récupération (justesse) | 107 % (biais +7 %) | 114 % (biais +14 %) | 75 % (biais −25 %) | 69 % (biais −31 %) |
| CV de la concentration (écart-type / a, rapporté à C) | 0,200/1,067 ≈ 19 % | 0,274/1,144 ≈ 24 % | 0,167/0,751 ≈ 22 % | 0,176/0,692 ≈ 25 % |
Interprétation :
- Linéarité : R² ≥ 0,99 pour les quatre droites, ce qui est satisfaisant.
- Justesse : pour une fraction ≤ 1 µg/kg, l'intervalle admis est −50 % à +20 %. X (+7 % et +14 %) et Y (−25 % et −31 %) sont dans l'intervalle. Y est nettement sous-estimé, ce qui suggère des pertes à l'extraction ou un effet de matrice.
- Fidélité : sous 10 µg/kg, la décision ne fixe pas de CV limite, qui doit être « le plus faible possible ». À titre indicatif, l'équation de Horwitz donnerait à 1 µg/kg (C = 10−9) : CV = 2(1 − 0,5 × (−9)) = 25,5 ≈ 45 %. Les CV obtenus (19 à 25 %) restent bien en dessous.
- Sélectivité : les blancs donnent un bruit de fond faible (amplitude relative moyenne d'environ 0,1 à 0,16 pour le signal 1), sans pic interférent notable.
- Identification :
- TR relatif (CV exigé < 2,5 % en LC). X : 0,010/1,032 ≈ 1,0 %, conforme. Y : 0,026/0,997 ≈ 2,6 %, supérieur à 2,5 %, non conforme. Plusieurs essais de Y (TR relatif ≈ 0,92–0,95, contre 1,008 pour l'étalon) sortent de la tolérance de ±2,5 %.
- Rapport d'ions : l'ion le moins intense représente environ 26 à 30 % du plus intense, d'où une tolérance de ±25 % en LC-MS/MS. X : référence 0,280, intervalle [0,210 ; 0,350]. L'essai 9 (0,378) est hors tolérance ; le CV du rapport vaut 0,035/0,300 ≈ 12 %. Y : référence 0,262, intervalle [0,197 ; 0,328]. L'essai à 0,366 est hors tolérance ; le CV vaut 0,042/0,256 ≈ 16 %.
- Taux d'identification au niveau de validation : X = 19/20 = 95 % ; Y = 16/20 = 80 % (4 non identifiés).
- CCα / CCβ (tableaux de validation) : X = 0,01 / 0,02 ppb pour les deux signaux ; Y = 0,03 / 0,07 ppb (signal 1) et 0,09 / 0,18 ppb (signal 2). Toutes ces valeurs sont inférieures à la LPMR de 1 ppb.
3) La méthode est-elle validée ?
- Molécule X : oui. Linéarité, justesse, fidélité, identification (TR relatif conforme, 95 % d'identification, soit un risque β de 5 %) et CCβ < LPMR sont satisfaisants.
- Molécule Y : non. Justesse et CCα/CCβ sont acceptables, mais l'identification ne l'est pas : CV du TR relatif > 2,5 % et 20 % de faux négatifs au niveau de validation, bien au-delà des 5 % admis. Il faut revoir la chromatographie de Y (stabilité du temps de rétention, colonne, gradient, équilibrage), puis revalider.
4) CCα = 1,12 / 1,19 ppb et CCβ = 1,19 / 1,29 ppb pour X
La capacité de détection doit être inférieure ou égale à la LPMR (CCβ ≤ 1 ppb) pour garantir qu'un échantillon contenant X au niveau de la LPMR sera détecté dans au moins 95 % des cas. Ici CCβ > 1 ppb sur les deux signaux (et même CCα > LPMR) : avec ces limites, la méthode n'est pas validée pour X au niveau exigé. Elle manque de sensibilité et il faut l'améliorer (préparation, concentration de l'extrait, réglages MS).
5) Échantillon contenant X à 0,6 ppb
X a une LPMR : c'est donc une substance non autorisée, et la LPMR n'est pas une tolérance. La décision se prend par rapport à la CCα de la méthode validée (0,01–0,02 ppb). Comme 0,6 ppb > CCα, l'échantillon est non conforme (présence de X), même si la teneur est inférieure à 1 ppb (réponse probable, fondée sur les CCα validées de la question 2).
Stratégie utilisée : méthode multi-analytes de dépistage (screening), qui trie les échantillons « suspects », puis confirmation par LC-MS/MS en MRM avec deux transitions (un précurseur et deux ions fils, soit 4 points d'identification), TR relatif et rapport d'ions.
Pour confirmer le résultat : réanalyser une nouvelle prise d'essai du même échantillon en mode confirmatoire, dans une série contenant un blanc, un blanc supplémenté au niveau voisin et la gamme d'étalonnage. Vérifier les critères d'identification (TR relatif, rapport d'ions dans les tolérances), éventuellement par ajouts dosés. En cas de contestation, une contre-expertise est réalisée sur l'échantillon de réserve.
Exercice III — Carte de contrôle (molécule M à 0,1 µg/kg)
1) Élaboration, suivi, but et interprétation
- Élaboration : analyser au moins une vingtaine de fois, dans des conditions de fidélité intermédiaire (jours, opérateurs, lots de réactifs différents), un blanc supplémenté à 0,1 µg/kg. On calcule la moyenne m (ligne centrale) et l'écart-type s. On trace les limites de surveillance à m ± 2s et les limites de contrôle (action) à m ± 3s.
- Suivi : à chaque série, on porte le rapport aire analyte / aire étalon interne du contrôle sur la carte, dans l'ordre chronologique. La série n'est acceptée que si le point respecte les règles de décision. Les limites sont réévaluées périodiquement.
- But : vérifier en continu que la méthode reste sous maîtrise statistique (justesse et fidélité stables) et détecter tôt une dérive (colonne, source MS, étalons, réactifs).
- Interprétation : un point hors des limites d'action, ou une tendance, signale une cause assignable. Sur la carte fournie, les points restent entre les limites tracées, mais se regroupent par séries autour ou au-dessus de la moyenne : c'est à surveiller avec les règles ci-dessous.
2) Critères de dysfonctionnement et conduite à tenir
- Un point au-delà d'une limite d'action (± 3s).
- Deux points consécutifs (ou 2 sur 3) au-delà de la même limite de surveillance (± 2s).
- Une suite de 7 à 9 points consécutifs du même côté de la moyenne (biais).
- Une suite de 6 à 7 points consécutifs en hausse ou en baisse (dérive).
Si la série est hors contrôle : ne pas libérer les résultats, arrêter les analyses, ouvrir une fiche de non-conformité, rechercher la cause (étalons, étalon interne, colonne, source, calcul), la corriger, puis refaire le contrôle et réanalyser la série. Il faut aussi évaluer l'impact sur les résultats déjà rendus depuis le dernier point sous contrôle et, si nécessaire, informer les clients.
3) Essai interlaboratoires (EIL)
Définition : un organisateur envoie le même échantillon à plusieurs laboratoires, qui l'analysent chacun selon leur méthode. On compare ensuite les résultats à une valeur de référence (essai d'aptitude).
Objectifs : évaluer la justesse du laboratoire par une comparaison externe, détecter des biais invisibles en interne, apporter une preuve de compétence exigée pour l'accréditation, et aider à valider ou comparer des méthodes.
Interprétation : on calcule le score z = (xlabo − Xréf) / σEIL. Si |z| ≤ 2, le résultat est satisfaisant ; entre 2 et 3, il est discutable (analyse de cause) ; si |z| ≥ 3, il est non satisfaisant (non-conformité et action corrective). On reporte les scores z successifs sur une carte de contrôle des z, avec des limites à ±2 et ±3, pour suivre les tendances d'une campagne à l'autre.
Exercice IV — Dosage HPLC de l'ivermectine (0,088 g/100 mL)
1) Principe de la chromatographie (cas de l'ivermectine)
Les solutés se partagent entre une phase stationnaire et une phase mobile. Ils migrent d'autant plus lentement qu'ils ont d'affinité pour la phase stationnaire. Ici, c'est une chromatographie de partage en phase inverse : phase stationnaire apolaire (silice greffée C18), phase mobile polaire (acétonitrile / méthanol / eau 51/34/15), élution isocratique à 1 mL/min et détection UV à 254 nm. L'ivermectine, très lipophile, est fortement retenue (≈ 38 min pour H2B1a). Le petit pic vers 2–3 min correspond au front de solvant (temps mort). La quantification se fait par étalonnage externe, en comparant les aires de l'échantillon (SE) à celles de l'étalon (SS).
2) Les molécules H2B1a et H2B1b
Ce sont les deux constituants de l'ivermectine, des homologues : leurs formules brutes (C48H74O14 et C47H72O14) ne diffèrent que d'un groupement CH2 (875,1 − 861,1 = 14 g/mol). Ce groupement se trouve sur la chaîne latérale : sec-butyle pour B1a, isopropyle pour B1b. Leur squelette et leur chromophore sont identiques, donc leur réponse UV est comparable. H2B1b, un peu moins hydrophobe, sort avant H2B1a en phase inverse (≈ 28 min contre ≈ 38 min).
3) Améliorer la séparation
- Augmenter la proportion d'eau (éluant moins fort) : les deux composés sont plus retenus et mieux séparés.
- Modifier le rapport acétonitrile / méthanol pour jouer sur la sélectivité, ou passer en gradient.
- Augmenter l'efficacité : particules plus fines (5 ou 3 µm au lieu de 10 µm), colonne plus longue, débit plus faible.
- Thermostater la colonne (la température modifie rétention et sélectivité), ou changer de phase (C8, phényle…).
4) Teneur en ivermectine
Concentrations : l'étalon SS contient 50 µg/mL (≈ 10 mg dans 10 mL, puis 1 mL dans 20 mL). L'échantillon SE contient en théorie 880 µg/mL ÷ 20 = 44 µg/mL (1 mL de solution à 0,088 g/100 mL dans 20 mL).
Aires totales (B1a + B1b) :
- SS : 1 302 786 ; 1 386 885 ; 1 319 880, soit une moyenne de 1 336 517 (CV ≈ 3,3 %).
- SE : 1 199 022 ; 1 221 597 ; 1 218 501, soit une moyenne de 1 213 040 (CV ≈ 1,0 %).
Calcul : CSE = 50 × 1 213 040 / 1 336 517 = 45,4 µg/mL. Dans le produit : 45,4 × 20 = 907,6 µg/mL, soit 90,8 mg/100 mL, c'est-à-dire 103,1 % de la teneur nominale (88 mg/100 mL).
Correction par la pureté du certificat : le certificat de l'étalon indique B1a 92 % et B1b 4 %, soit 96 % d'ivermectine. Si l'on corrige la concentration de l'étalon (50 × 0,96 = 48 µg/mL), on trouve 43,6 µg/mL, soit 87,1 mg/100 mL = 99,0 % (réponse probable : l'énoncé ne dit pas si les 50 µg/mL sont déjà corrigés).
Composition de l'échantillon : H2B1a / (B1a + B1b) = 1 206 779 / 1 213 040 ≈ 99,5 % (exigence ≥ 90 %) ; H2B1b / (B1a + B1b) ≈ 0,5 % (exigence ≤ 5 %).
Conclusion : dans les deux cas, la teneur se situe entre 95 et 105 % du nominal, et les proportions de B1a et B1b respectent les spécifications : le médicament est conforme. On peut remarquer que la répétabilité des injections de l'étalon (CV ≈ 3,3 %) est un peu élevée pour un dosage HPLC : on vérifie habituellement la conformité du système (CV des injections de l'étalon) avant de conclure.
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